特許

• ブルーベリー葉専用品種「くにさと35 号」（第23433号）
• ブルーベリーの栽培方法（第5712672号）
• 植物の葉の採葉機（第5034097号）
• スノキ属植物の育苗方法（第5177349号）
• 肝臓脂肪蓄積抑制剤、脂肪肝改善剤、及びそれらの医薬組成物（第4568809号）

引用文献

• Tetsumura,T., Kajiwara,Y., Honsho,C., Sato-Yamauchi,M.,Sugimoto,y., and Kunitake,H. (2012). Effective Micropropagation of Rabbiteye Blueberries for Leaf Tea Production. Environmental Control in Biology. 50(3), 289-296.


• Tsuda,Hirotoshi., Kunitake,H., Yamasaki,M., Komatsu,H., and Yoshioka,K. (2013). Production of Intersectional Hybrids between Colchicine-induced Tetraploid Shashanbo (Vaccinium bracteatum) and Highbush Blueberry 'Spartan'. American Society for Horticultural Science. 138(4), 317–324.

ブルーベリー茎エキス末で見つかった機能性
DISCOVERY

Tie2を活性化する作用

Tie2（たいつー）とは？

ある種の疾患では、無秩序に血管新生が起こることがあります。
例えば、腫瘍、慢性関節リウマチ、糖尿病網膜症、高脂血症、高血圧などの疾患において、血管新生が観察されます。 血管新生は、血管内皮細胞に発現する受容体型チロシンキナーゼTie2（Tyrosine kinase with Ig and EGF homology domain 2）を活性化させることにより、抑制されることが知られています。
Tie2は、血管やリンパ管の細胞に存在する受容体で、生体内ではアンジオポエチン－１により活性化し、毛細血管の働きを助けます。
加齢によりアンジオポエニン－１ の分泌量が減少すると、Tie2活性が弱まり、毛細血管にダメージを与えるとされています。
また、虚血性疾患においては、Tie2の活性化により、血管腔が拡大化されて疾患が改善し得るとの報告があります。Tie2の活性化により、血管内皮細胞の細胞死を抑制するとの報告があります。
このように、Tie2の活性化により、血管新生が抑制されるだけでなく、血管（毛細血管を含む）を正常化及び安定化させるとの知見があります。
Tie2の活性化により血管新生を抑制する天然物としては、桂皮の抽出物などが提案されています。

Tie2活性の測定

マウス試験による測定

疲労感の低減、Tie2の発現量

アイケア、目元美容

特許

《くにさと35号》はラビットアイ系ブルーベリーを品種改良して生まれたブルーベリー葉茶用の品種で、宮崎県内のみで栽培されています。
研究の結果、《くにさと35号》の茎の熱水抽出物により高いTie2活性化作用があることが分かり、特許を出願しています。

• Tie2活性化組成物及びその製造方法 (特開2018-193346)
• 血圧上昇抑制効果（特開2007-217406）

引用文献

• Sakaida,H., Nagao,K., Higa,K., Shirouchi,B., Inoue,N., Hidaka,F., Kai,T., Yanagita,T. (2007). Effect of Vaccinium ashei reade leaves on angiotensin converting enzyme activity in vitro and on systolic blood pressure of spontaneously hypertensive rats in vivo. Biosci. Biotechnol. Biochem.71(9), 2335–2337.
• 松浦 靖, 金子 真緒, 平原 秀秋, 日高 史絵, 境田 博至, 甲斐 孝憲, 柚木崎 千鶴子, 窄野 昌信(2013). 高血圧自然発症ラットにおけるブルーベリー葉の血圧上昇抑制作用 日本食品科学工学会誌 60(12), 689-694.

免疫賦活効果

免疫賦活成分　LPS（リポポリサッカライド）を確認

LPS は免疫細胞のマクロファージを活性化させる物質として知られています。
ブルーベリー茎エキス末はLPS が611.4ng/g含まれており、小麦の約3倍、大豆の約30倍以上の含有量になります。 また、類似原料のブルーベリー葉エキス末と比較した場合は、約470倍以上の含有量になります。

免疫賦活試験

マクロファージの活性化を抑制

RAW264細胞（理化学研究所）を96ウェルプレートに定着させた後、リポ多糖とブルーベリー茎エキス末を添加した培地に交換して2時間培養し、ニュートラルレッドを添加して更に3時間培養しました。バッファーで洗浄した細胞に取り込まれたニュートラルレッドの量を測定することにより、マクロファージの活性を評価しました。また、WST-8による生細胞測定も実施しました。
その結果、ブルーベリー茎エキス末の添加により、リポ多糖によるマクロファージの活性化が抑制されました。また、生細胞測定の値が減少していないため、細胞死によるものではないことがわかります。

歯周病菌への効果

歯周病菌への効果の実証

本試験は、ブルーベリー茎エキス末の抗菌性試験(オーラルケア関連)を調査する目的で行われました。

試験概要

• 各微生物の培地に30mg/ml、15mg/ml、7.5mg/ml・・・のように、半分の濃度になるように茎エキス末を添加し、肉眼での観察で微生物の増殖が認められない濃度(MIC値)を求める。MIC値が小さいほど抗菌性が高い。
  (例)15mg/mlでは増殖していないが、7.5mg/mlでは増殖している→MIC値は7.5mg/ml
• 茎エキス末が完全に水に溶けず、溶け残った成分はフィルターで除去した。

試験結果

• ジンジバリス菌(P. gingivalis、歯周病菌)：MIC値＝1.9mg/ml
• ミュータンス菌(S.mutants、虫歯菌)：MIC値＝15mg/ml

考察

• 茎エキス末には歯周病菌や虫歯菌を抑える効果があり、オーラルケアに役立つ素材であることが確認されました

ペットへの効果の実証

上記細胞試験の結果から、ブルーベリー茎エキス末にはペットに対して有用な効果があると考えられました。
そこで、獣医師の協力の下、ペットの胃機能改善に関する試験を行いました。

腎機能の改善

犬の死亡原因の1位はガンで、第2位、第3位が心臓病や腎不全となっております。
猫の死亡原因の1位もガンで、次いで腎不全、感染症となっております。ペットの高齢化により腎不全による死亡が増加しております。
下記は、慢性腎機能低下の犬における腎機能改善効果について検証及び安全性の確認試験の結果です。 腎機能のステージI（被験犬1、2）、ステージII（被験犬3）摂取量：10㎎/㎏/日（被験犬1、2） 、3.34㎎/㎏/日にて試験（被験犬3）を行いました。

下記は、重度腎不全の猫（体重：5㎏）、輸液治療およびアンチノールを投与している症例に対し、ブルーベリー茎エキス末（30㎎×2/日）を追加で投与した結果です。 アンチノールは関節系に良く働きますが、ブルーベリー茎エキス投与前は歩行困難でした。しかし、ブルーベリー茎エキス投与後は通常の歩行ができるようになるまで回復しました。

インフルエンザウイルス不活性化効果

インフルエンザウイルスへの効果の実証

本試験は、ブルーベリー茎エキス末のインフルエンザウイルス不活化活性（抗インフルエンザ効果）を調査する目的で行われました。

試験概要

• ブルーベリー茎エキス末を滅菌イオン交換水を用いて50mg/mLに調整し、遠心分離した後の上清を試験に用いました。
• 滅菌水に希釈調整したインフルエンザウイルス（約1.3×10⁶PFU/mL）と試験液を1:9の割合で混合し、室温にて30分間静置反応させました。
• 30分経過後反応液を回収し、適宜希釈したものを宿主細胞（MDCK細胞）に添加し、37℃、1時間の感染処理を行いました。
• 宿主細胞を洗浄後、37℃で2日間静置培養しました。その後形成されたプラーク数を目視で計測し、処理前のウイルス感染力価に対する、処理後溶液の残存ウイルス力価（PFU/mL）を算出しました。

試験内容一覧

• 使用ウイルス インフルエンザウイルス　H1N1A/PR/8/34
• 宿主細胞 MDCK細胞（イヌ腎細胞）
• ウイルス感染力価 1.3×10⁵PFU/mL
• 試験検体 ブルーベリー茎エキス末を、滅菌イオン交換水を用いて50 mg/mLに調整し、3,000rpm、5分間遠心分離後の上清
• 処理時間 30分

試験結果

• 茎エキス末の最大溶解濃度水溶液は30分の作用時間でインフルエンザウイルス1.1×10⁵PFU/mLを99.9%以上不活性化することを確認し、高い抗インフルエンザ活性があることを確認しました。

学術論文・メディア掲載一覧
ACADEMIC PAPERS / MEDIA

研究論文一覧

• Tetsumura,T., Kajiwara,Y., Honsho,C., Sato-Yamauchi,M.,Sugimoto,y., and Kunitake,H. (2012). Effective Micropropagation of Rabbiteye Blueberries for Leaf Tea Production. Environmental Control in Biology. 50(3), 289-296.
• Tsuda,Hirotoshi., Kunitake,H., Yamasaki,M., Komatsu,H., and Yoshioka,K. (2013). Production of Intersectional Hybrids between Colchicine-induced Tetraploid Shashanbo (Vaccinium bracteatum) and Highbush Blueberry 'Spartan'. American Society for Horticultural Science. 138(4), 317–324.
• Sakaida,H., Nagao,K., Higa,K., Shirouchi,B., Inoue,N., Hidaka,F., Kai,T., Yanagita,T. (2007). Effect of Vaccinium ashei reade leaves on angiotensin converting enzyme activity in vitro and on systolic blood pressure of spontaneously hypertensive rats in vivo. Biosci. Biotechnol. Biochem.71(9), 2335–2337.
• 松浦 靖, 金子 真緒, 平原 秀秋, 日高 史絵, 境田 博至, 甲斐 孝憲, 柚木崎 千鶴子, 窄野 昌信(2013). 高血圧自然発症ラットにおけるブルーベリー葉の血圧上昇抑制作用　日本食品科学工学会誌 60(12), 689-694.

ブルーベリー葉粉末についてはこちら